升麻配方颗粒的制备工艺和质量控制研究

升麻是升麻的干燥根茎。，兴安升麻(Turcz。)Max2im或毛茛科的升麻[1]。升麻配方颗粒是由升麻饮片经水提取、浓缩、干燥、制粒而成的单味中药配方颗粒。据报道，升麻含有异阿魏酸、阿魏酸、其他三萜和香豆素[2]。异阿魏酸具有抗炎镇痛作用，是本品的主要成分之一[3]。《中国药典》(2005年版)以异阿魏酸的含量作为评价升麻质量的指标。本实验以符合中国药典(2005年版)的升麻为原料，研究升麻颗粒的制备工艺和质量标准。
1仪器和试剂:美国安捷伦公司HP 1100色谱仪、G1311A四泵、G1322A、G1314AVWD、HP Rev. A. 0501化学工作站；美国安科公司TDL-40B高速离心机；昆山超声波仪器有限公司KQ218超声波清洗机；DZG-401电真空空干燥箱，天津天宇实验仪器公司；Sartorius BS210S电子天平，天津奥特塞恩斯仪器有限公司
甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水，乙醇、糊精等其他试剂为分析纯。升麻饮片为天津中药饮片厂提供的5 kg塑封升麻饮片，经高教授鉴定，符合《中国药典》2005年版要求。异阿魏酸对照品(批号077329810)购自天津市药品检验所。
2方法和结果2。1 .优化升麻配方颗粒的制备工艺。由于单味中药配方颗粒是由单味中药饮片经水提取(水蒸气提取)、浓缩、干燥、制粒后制成的颗粒，因此本实验制备工艺中提取溶剂确定为水。异阿魏酸是一种水溶性好的酚酸成分。本实验预取10克升麻饮片，加12倍量水回流1小时，过滤，滤渣再次回流，合并所得滤液。根据《中国药典》(2005年版)附录V ID，采用高效液相色谱法测定提取物及原饮片中异阿魏酸的含量，计算出异阿魏酸的提取率大于80%，提取率大于25%。预实验证明，在此基础上设计的正交实验能够达到预期效果。
2。1.1试验因素水平根据升麻主要有效成分的水溶性和预试验结果，确定以异阿魏酸的转移率和提取得率为指标，以加水量、提取时间和提取次数进行正交试验。采用L9 (34)正交表考察水提取工艺参数。因子等级表如表1所示。(表略)2。1.2用于考察异阿魏酸转移率的供试品溶液的制备:根据正交设计方案，称取9片升麻饮片，每片25 g，加入相应倍量的自来水，微沸回流提取，过滤，合并滤液，摇匀。取5 mL，通过0122μm微孔滤膜过滤，弃去一次滤液。
另外，取升麻饮片适量，粉碎，取粉末约0.25 g(过2号筛)，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入10%乙醇25 mL，称重。加热回流2.5 h，冷却，称取重量，加入10%乙醇补足重量，摇匀，过滤，收集滤液，得升麻试液。对照溶液的制备[1]:准确称取异阿魏酸对照品9.21 mg，置于50 mL棕色容量瓶中，用10%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，加10%乙醇至刻度，摇匀，即得成品(每1 mL含18.42μg异阿魏酸)。色谱条件:cosmosil C18-ms-ⅱ柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)；流动甲醇-0.1%乙酸(30∶70)；检测波长为316nm；柱温为30℃。测定结果:用高效液相色谱法测定9个实验提取物中异阿魏酸的含量和升麻饮片中异阿魏酸的含量，并计算转移率。结果如表2所示，方差分析如表3所示。根据直观分析，各因素对异阿魏酸提取率的影响程度依次为C >B >A。2.1.3膏收率的考察:准确吸取9个正交试验所得的各提取物5ml，60℃水浴蒸发，60℃干燥至恒重，计算膏收率。实验结果见表2，方差分析见表3。在直观分析中，各因素对转移率的影响顺序为C > B > A；对奶油产量的影响顺序为C > A >B，得到的条件为A3B3 C3。2.1.4以异阿魏酸的提取率和霜收率为指标，通过目视分析和方差分析综合评价提取工艺的确定。C因素(提取次数)是最重要的因素，条件都是3级，即提取回流3次；对于因素A(加水量)和因素B(提取时间)，虽然转移率和膏状物提取率的直观分析条件都在3级，但转移率比膏状物提取率相对重要，在转移率的直观分析上，2级和3级也差不多。考虑到经济因素，A因素和B因素的条件都在2级；综合条件为:10倍量水，微沸回流1.0h，回流3次。2.2升麻颗粒的成型依据升麻颗粒的优化工艺，即取升麻饮片500 g，加10倍量水，微回流1 h，回流3次，合并3次提取液，水浴浓缩至稠膏，减压干燥至相对密度为1.32 ~ 1.39 (50 ~ 60℃)的干膏，按1∶1的质量比加入糊精，加入糊精。将软材过14号筛，制粒，干燥，整粒，即得升麻配方颗粒。2.3升麻颗粒含量的测定2。3.1参见2。1.2用于色谱条件。异阿魏酸分离的色谱图如图1所示。(图略)2。3.2关于对照品溶液的制备，见2.1.2。2.3.3供试品溶液的制备:将升麻配方颗粒研磨成细粉，准确称取约0.25 g，置于带塞锥形瓶中，准确加入10%乙醇25 mL，称取，水浴加热回流2.5 h，放冷，称取，用10%乙醇补足重量，摇匀，滤过，弃去一次滤液，用0122微米微孔滤膜取二次滤液。根据上述方法，总共制备了5种测试溶液。2.3.4线性关系考察:将异阿魏酸对照品溶液分别注入5、7.5、10、12.5、15μL，每次注入3次，以测得的平均峰面积为纵坐标，注入量为横坐标，绘制标准曲线，得到异阿魏酸在0.092 1 ~ 0.276 3 μ g范围内线性关系良好，标准曲线方程为Y = 4 974.473 26x。2.3.5精密度试验:连续进样5次，进样体积为10 μL，记录峰面积，RSD为0.943% (n = 5)。2.3.6重复性试验:分别注射5份升麻颗粒试液，每份连续注射3次，注射体积为10μ L，测定试液中的异阿魏酸，平均含量为0.187%，RSD为1.06% (n = 5)。2.3.7内部稳定性试验:取升麻配方颗粒样品溶液，每2小时注射一次，注射量10 μL，共注射5次。测定异阿魏酸的含量，并检查样品在8小时内的稳定性。相对标准偏差为0.566% (n = 5)。2.3.8样品回收试验准确称取5份升麻颗粒样品，将每份样品中异阿魏酸含量的100%加入对照品中，按2中的方法制备5份升麻颗粒样品溶液。3.3.测定了异阿魏酸的含量，进样量为5 μL，平均回收率为99.16%。Rsd为1.81% (n = 5)，见表4。(表略)2。3.9 .升麻配方颗粒的含量测定。准确称取三批升麻配方颗粒，每批0.5 g，按2配制供试品溶液。3.3.根据含量测定的色谱条件，取10μL样品，计算异阿魏酸的含量。结果如表5所示。讨论3。1提取溶剂的选择异阿魏酸是升麻的主要有效成分之一，在《中国药典》(2005年版)中作为评价升麻质量的指标成分。虽然属于酚酸类，但有很多文章报道是从乙醇中大量提取的[4]。然而，考虑到颗粒剂的实际工业生产经济因素，以及与传统汤剂相比颗粒剂是一种改变了剂型的新药，作者在实验中使用水作为提取溶剂提取异阿魏酸。既保证了配方颗粒中异阿魏酸的含量，又尽可能保证了更多的其他水溶性成分，是一种比较合适的提取方法。3.2正交试验因素的确定正交试验因素为加水量、提取时间和提取次数。在实验结果中，从异阿魏酸转移率和提取率的方差分析来看，这三个因素没有显著影响。在预试验中，作者试图将升麻的粉碎粒度作为一个因素，这个因素对异阿魏酸的转移率有显著影响。但为了保持与传统汤剂的一致性，要求研磨粒度不得作为影响因素考虑。而且受试者要求的转移率测定方法是以药典为准的，药典是针对药材的。配方颗粒和药材还是有区别的，可能药典方法不适合配方颗粒。因此，升麻配方颗粒有待进一步研究。3.3工艺指标的确定在许多正交优化实验中，当有两个评价指标时，往往采用两个指标加权评分的方法来确定工艺。这种方法在两个指标的变化趋势不一致时就显示出其优越性，但两个指标的重量比没有权威理论指导，完全靠经验确定，因为对于不同种类的药材，药典规定的药理活性成分和总浸出物(浸膏)不能一概而论。本实验中没有引入重量的概念，因为提取率和奶油得率两个指标的变化趋势是一致的，说明提取过程有利于异阿魏酸的提取率，奶油得率也高。所以最终选择了以上工艺。3.4升麻配方颗粒中异阿魏酸含量的规定据文献报道，不同产地升麻中异阿魏酸的含量差异很大，在0.10%-0.36%之间[3]。因此，以不同产地的饮片为原料生产的配方颗粒中异阿魏酸的含量会不均匀。完善的含量控制标准是保证升麻颗粒质量的重要手段。本实验测定了原料药材中异阿魏酸的含量为0.214%，三批样品检测结果显示异阿魏酸含量均在0.180%以上。该制备过程中异阿魏酸的最终转移率约为84%，提取过程中的提取物得率约为25.12%。因此，根据理论换算，升麻配方颗粒和升麻原料药材中异阿魏酸的含量应基本相同，实际实验数据与理论换算一致。药典规定升麻中异阿魏酸的含量不得低于0.10%。因此，暂规定本品中异阿魏酸的含量不得低于118mg·g-1。3.5存在的问题。应受试者要求，将升麻饮片以微沸状态水提取1 h，然后制成配方颗粒。但有效成分异阿魏酸不稳定，遇光会分解。虽然产品中异阿魏酸含量超过药典要求，但不排除其他成分转化的贡献。至于其他成分有没有损失，配方颗粒比原饮片好还是差，还需要进一步深入研究。