生物实验——毒性实验

(一)概述新药或新制剂，在临床使用前必须经过这一步骤。虽然药物对人的作用不能在动物身上完全表现出来，但对于一种新药来说，这仍然是一个非常有用的参考数据。因此，为了保证患者用药安全，新药在临床应用前必须进行毒性试验。毒性试验的类型可根据药物的性质、给药途径、方法和时间等选择。如果服用一些药物，会出现中毒症状；有些药物在秦晓等之前需要长期服用。所以药物的毒性试验要根据其特性来确定。

(二)急性毒性试验(一般安全性试验)5只体重18-22g的健康小白鼠，经尾静脉(或腹腔)注射一定剂量的药液(体积应为0.5ml，可注射生理水稀释成不同浓度)，持续4-5秒，观察不良反应(如惊厥、四肢瘫、步伐不稳、竖毛、呼吸抑制等。)进行了观察。以主死亡为指标，注射后48小时内应无死亡。在死亡的情况下，应重新测试另外10只小鼠，并且所有小鼠在48小时内不应死亡(不应重复使用做过该测试的小鼠)。

【注意事项】①供试品静脉注射有困难时，可采用腹腔注射，注射量仍为0.5ml，注射时间不限，注射后72小时内不允许死亡。

②如果某种药物没有安全试验剂量，可以将人用的临床剂量乘以一定的安全系数，再换算成小鼠的体重剂量。安全系数应根据药物的纯度和临床试验来确定。一般治疗药物可以定在50-100，需要长期服用的药物可以定在100以上。

例如，成人(体重50公斤)每次注射剂量为4毫升，安全系数为50，小鼠(体重20克)的剂量为:

小鼠剂量= 4× 50/50000× 20 = 0.08ml

取本品0.08ml，用0.9%氯化注射液稀释至0.5ml，作为供试品的注射剂量。

③也可用同样的方法进行试验(即给小鼠注射一定剂量，如果5只小鼠中只有1只死亡，则减少剂量再试，直到一剂5只小鼠不死亡为止)。找出药物的安全系数。

计算公式:

安全系数=小鼠耐受量×成人体重(g)/成人剂量×小鼠体重(g)。

例:一种药物的剂量为4ml，当剂量为0.2ml(稀释至0.5ml)时，静脉注射到小鼠体内导致死亡。当剂量减少时，再试一次。剂量为0.16ml/20g时，无反应。因此，含苯甲醇的注射液会对实验产生干扰，应引起注意。

④苯甲醇对小鼠有一定的毒性反应，含苯甲基的注射液常干扰检测结果，应引起注意。

(3)需要长期服用的药物，应进行亚急性或慢性毒性试验。方法与急性毒性试验基本相同。根据小鼠体重，每次口服或腹腔注射的剂量为人体剂量的20-50倍，连续给药1-8周。慢性毒性，连续使用3-6个月。用药期间，应仔细观察实验动物的体重变化、进食量、饮水量、不良反应或死亡情况。动物试验前后，应检查血、肝、肾等功能进行比较。对实验中死亡或完成实验的动物进行解剖，观察其内脏、管道和组织切片。根据试验结果，可用于临床。

【注意】①应控制亚急性和慢性毒性试验。这是因为不同个体的饲养环境和健康状况往往差异很大。如果没有空白色对照组比较给药后内脏器官的变化，往往很难判断实验结果。

②对于非口服药物，要注意灭菌，防止动物感染，影响结果。

③毒性试验的给药途径应与临床应用的给药途径相同。不同给药途径的毒性往往差异很大。例如，口服给药的LD50比静脉内或腹膜内注射的大几倍。

④毒性实验前，应仔细考虑实验设计，避免临时改变实验条件。实验用动物一般应在实验室停留2周以上，然后使动物适应环境后再进行实验。

⑤实验室应注意加强对动物的管理，保持清洁。实验中途死亡的动物要客观分析，才能正确总结判断。

⑥毒性实验中，除记录测量指标外，还应记录分支动物的一般状态，如兴奋、抑制、麻痹、呼吸、食欲、体重等。，应仔细观察，并密切观察和详细记录药物在实验中的时间、速度和毒副作用特点，以便综合分析。

⑦在亚急性和慢性毒性实验中，应根据药物的不同性质和实验要求，在给药前后和实验过程中对实验动物易发生毒性反应的主要器官进行检查。检查项目有:

血象:包括血红蛋白、红细胞、白细胞和分类计数等。

b:肝功能:肝脏是身体重要的代谢器官。它不仅在糖、蛋白质和脂类的代谢中起重要作用，而且还是体内许多药物的解毒场所。因此，我们应该检查肝功能。

c:肾功能:大部分药物是从肾脏排出的，所以需要确定药物对肾功能有无损害及损害程度，包括血液中非蛋白氮的含量和尿常规检查。

d组织切片:可以进一步了解药物对各器官有无损伤以及损伤程度。动物在不同时期可以批量宰杀，其心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等。可以切片，与对照组比较，观察药物对各种组织是否有可逆或不可逆的损伤。