生物实验——生长激素生物检定法

1.垂体大鼠重量法

该法律体系是一种通过比较生长激素标准品与去垂体幼鼠的试验品的增重来确定试验品效价的方法。

标准溶液的制备

实验当天，取标准样品，根据标注的效价，用含0.1%牛血清白蛋白的0.9%氯化钠溶液配制成高、低浓度两种稀释液。一般高浓度稀释液每1ml含0.1 ~ 0.2 IU，低浓度稀释液每1ml含0.025~0.05IU，高低浓度之比(R)一般为1∶0.25。稀释剂包装成每日剂量并密封在-15℃保存，然后在使用时溶解。

测试溶液的制备

根据样品的标记效价或估计效价，与标准溶液的配制和保存方法相同。

取相同来源和品系的健康大鼠，出生26-28天，体重60-80g，性别相同。实验前2-3周摘除脑垂体，术后在清洁动物房饲养恢复。

方法:将术后2 ~ 3周切除垂体的大鼠，体重变化小于术前的10%，按体重平均分为4组，每组至少8只，每组编号并记录。从颈部皮下注射0.5毫升一种浓度的标准溶液或测试溶液，每天一次，连续6天。最后一次给药后24小时，处死大鼠并称重。必要时，实验结束后进行尸体解剖，切开蝶鞍区，肉眼检查垂体，取出有垂体的动物。给药后每只动物体重增加的克数作为响应值。受试物质和标准物质各剂量组引起的反应的平均值应相等，低剂量组的重量应比未给药组显著增加，而高剂量组的重量增加不应达到限值。结果根据生物测定统计方法中的量效平行线，采用随机设计法计算效价和实验误差(附录ⅴ)。可靠性试验合格，本法置信限率FL(%)不超过50%。

2.去脑垂体鼠胫骨测试论坛

在该法律体系中，通过比较切除垂体的大鼠胫骨骺板宽度与供试品的增加程度来确定供试品效价的方法。

标准溶液和测试溶液的制备与重量法相同。

方法:该方法可与去垂体大鼠称重法同时进行。重量法实验结束后，取下双腿胫骨，用10%甲醛保存，沿矢状面从胫骨近端顶部和中部切开，放入10%甲醛中，水洗10分钟，放入丙酮中10分钟，水洗3分钟，用2%硝酸银染色2分钟，洗完后在水中用强光照射至棕黑色，用10%硫代硫酸钠固定30秒，放入80%乙醇中。沿平面切取约1mm的切片，置于显微镜下，测量胫骨骺板宽度作为反应值。实验结果按“生物测定统计法”(附录ⅹⅰⅴ)进行。

采用随机设计方法计算效价和实验误差。可靠性测试应该通过。这个方法是1。去垂体大鼠的体重。

该法律体系是一种通过比较生长激素标准品与去垂体幼鼠的试验品的增重来确定试验品效价的方法。

标准溶液配制实验当天，取标准溶液，用含0.1%牛血清白蛋白的0.9%氯化钠溶液，按标示的效价配制高、低浓度稀释液。一般高浓度稀释液每1ml含0.1 ~ 0.2 IU，低浓度稀释液每1ml含0.025~0.05IU，高低浓度之比(R)一般为1∶0.25。稀释剂包装成每日剂量并密封在-15℃保存，然后在使用时溶解。

试液的配制是根据试液的标示效价或估计效价，与标准溶液的配制和保存方法相同。

取相同来源和品系的健康大鼠，出生26-28天，体重60-80g，性别相同。实验前2-3周摘除脑垂体，术后在清洁动物房饲养恢复。

方法:将术后2 ~ 3周切除垂体的大鼠，体重变化小于术前的10%，按体重平均分为4组，每组至少8只，每组编号并记录。从颈部皮下注射0.5毫升一种浓度的标准溶液或测试溶液，每天一次，连续6天。最后一次给药后24小时，处死大鼠并称重。必要时，实验结束后进行尸体解剖，切开蝶鞍区，肉眼检查垂体，取出有垂体的动物。给药后每只动物体重增加的克数作为响应值。受试物质和标准物质各剂量组引起的反应的平均值应相等，低剂量组的重量应比未给药组显著增加，而高剂量组的重量增加不应达到限值。结果根据生物测定统计方法中的量效平行线，采用随机设计法计算效价和实验误差(附录ⅴ)。可靠性试验合格，本法置信限率FL(%)不超过50%。