细胞状态不好?细胞反复污染?怎么办?
细胞污染怎么办?
细胞污染类型
化学污染物:培养基、血清、水中的杂质、内毒素、增塑剂、去污剂等
生物污染物:
细菌污染
真菌污染
支原体污染
交叉污染
关于污染源
· 环境:水浴锅、培养箱水盘、细胞培养培养内壁、超净台、桌面及试剂瓶身、细胞房空气消毒;
· 操作:细胞复苏、传代、冻存等过程中也可带入污染;
· 试剂:血清、基础培养基、胰酶、辅助试剂、营养添加物等;
· 耗材:培养皿或培养瓶、枪头;
· 细胞:本身携带污染、细胞老化、分化等。
如何进行污染源排查
可通过控制变量法对整个培养操作流程进行分析:培养试剂及辅助试剂等条件不变,重新复苏一株细胞,观察细胞是否有污染现象。
· 血清:其他试剂保持不变,仅更换血清;
· 基础培养基:其他试剂保持不变,仅更换基础培养基;
· PBS:其他试剂保持不变,仅更换PBS;
· 胰酶:若细胞复苏很好,一传代就污染,可以尝试其他试剂保持不变,更换消化用胰酶;
看细胞状态,细胞反复复苏都会出现污染,那可保持培养体系不变,培养其他类型且适用于此培养体系的细胞,观察是否有污染出现。整个培养体系,基础培养基、血清、营养添加物都可使用控制变量法进行排查。
其次,细胞间一旦发生污染,除了及时将细胞按照适当的方法处理外,还应当及时将细胞培养箱、细胞房等做好清洁和消杀,预防细胞污染问题反复。
备注:
空培不能用于污染来源排查:分别空培胰酶、PBS、冻存液、高压水;空培血清时,因为血清中富含蛋白,空培过程中会有沉淀产生;空培完全培养液(血清+基础培养基)时,若完全培养基培养后有污染出现,也不好判断是血清还是基础培养基,或者是操作过程中带入的污染。
消杀Tips
恒温培养箱消毒方案
清理细胞后:
1、 先用75%酒精擦拭细胞培养箱内壁,包括培养箱的平板、腔体以及储水槽;
2、 用蒸馏水将培养箱擦拭,避免高浓度酒精在腔体残留,且在后续的高温杀菌过程中腐蚀不锈钢腔体,损坏培养箱;
3、 启动培养箱自带高温消杀系统
4、 重新启用后,在后续的使用中注意培养箱滤膜的及时更换,储水槽最好使用灭菌后的蒸馏水,可加入少量硫酸铜预防污染;
细胞房空气消毒方案
细胞房地面消毒方案
最后,巧用抗生素,帮助预防污染~
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