admin 百科大全 2022-12-31 21:57:33

免疫组化结果的判读和呈现

上次，我们详细分享了免疫组织化学（IHC）的基本原理和操作流程。今天主要介绍免疫组化结果的判读。拿到染色的IHC片，我们如何判读染色结果，是否理想，是否达到预期效果呢？下面我们逐一来看：

一、染色结果准确性分析

对照设置：IHC实验必须同时设计阴性、阳性对照，以保证染色结果的可靠性和特异性。此外，根据不同实验要求还会设计替代对照、空白对照、抑制对照等。
对照结果：正常情况下，阴性对照不含目标抗原，染色后不着色；而阳性对照在细胞特定部位着色。在阴性、阳性对照均正确着色的前提下，才能进一步判断实验样本结果。
背景染色：免疫组化染色过程中产生的非靶抗原的呈色结果，属假阳性，是非特异性的，会严重干扰IHC染色结果的正确判断，应尽量避免。其产生原因可能包括：① 内源性干扰 (肝、肾等组织富含内源酶、生物素等吸附性强并催化DAB显色)；② 试剂原因 (抗体特异性较差、抗体与其他抗原存在交叉反应、抗体浓度不合适等)；③ 标本前处理不当 (组织固定不及时或固定不良所导致，细胞自溶抗原弥散移位等)；④染色过程操作不规范 (PBS洗涤不充分、组织干涸、抗原抗体孵育时间过长等)；⑤DAB试剂使用不当 (显色时间太长、DAB非新鲜配制）。

二、阳性标记样本的结果判断

对于实验样本的IHC结果，主要从定性、定量和定位三个方面判断。定性是指染色结果为阳性或阴性；定量是指阳性细胞的密度（百分比）和染色强度；定位是指阳性细胞在组织细胞中的形态、分布特定。

1. 阳性标记的定性判断（DAB标记为例）

在IHC片上，根据标本抗原多寡会在细胞特定部位由浅到深呈浅黄色-棕黄色-棕褐色粗颗粒。评分为：0分 (阴性, 无黄色)，1分 (阳性, 浅黄色)，2分 (阳性, 棕黄色)，3分 (阳性, 棕褐色)。

2. 阳性标记的定量判断（DAB标记为例）

阳性细胞的密度在低倍镜下，根据阳性细胞占总细胞数的比例 (例如IHC标记阳性肿瘤细胞占所有细胞的比例)，≤25% 为1分, 26%～50%为2分, 51%～75%为3分, 76%～100%为4分。

3. 阳性标记的定位判断

根据抗原在特定细胞中的分布，分为①胞膜型, ②胞质 (浆)型, ③胞核型, ④微绒毛型, ⑤复合型(胞膜-胞质兼有，胞核-胞质兼有，或微绒毛-胞质兼有)五种阳性细胞类型。

根据阳性细胞呈现组织学特点，分为局灶型、弥漫型、网状型等。①局灶型：阳性瘤细胞呈不规则小灶性分布。阳性细胞可多可少，排列不规则，无固定排列形式，阳性染色深浅不一；②弥漫型：阳性细胞呈弥漫性分布，细胞间无连接，也可以单个细胞散在分布；③网状型：主要见于细胞密度较大的大细胞肿瘤。标记物多为膜抗原；④腔缘型：阳性颗粒主要位于腺癌腔缘的微绒毛处。

三、阳性标记结果的计算

目前，IHC阳性标记结果大多采用积分综合计算。计算公式为：阳性标记颜色分值*阳性细胞的比例分值，cutoff值一般在6-7之间，低于cutoff值为低表达，反之为高表达。下面我们以几张图为例，演示计算方法。