Advanced Targeting Systems丨抗-6-His-SAP研究

标签靶向毒素是一种强大而特异的损伤剂，用于分子技术外科手术核糖体失活蛋白saporin（来自植物皂荚）是结合到靶向剂，该靶向剂识别表达6 His标记的蛋白质的YOUR细胞。一旦缀合物被内化，saporin脱离靶向剂，并使核糖体失活导致蛋白质抑制，最终导致细胞死亡。没有细胞表面标记的细胞影响多组氨酸标签的使用已成为蛋白质纯化的一种流行方法，常用于筛选过程作为您感兴趣的蛋白质或肽的标签。这种多组氨酸表位标签通常是由位于N端、C端或内部的六个连续组氨酸氨基酸残基组成。

6-His-Tag由于其与附着于琼脂糖凝胶的镍或钴金属离子结合的亲和力而被广泛使用，

其然后可用于纯化天然或变性状态的蛋白质。

多组氨酸标签的使用已成为蛋白质纯化的一种流行方法，通常在筛选过程中用作您感兴趣的蛋白质或肽的标签。这种多组氨酸表位标签通常由位于N端、C端或内部的六个连续组氨酸氨基酸残基组成。6-His-Tag由于其与附着在琼脂糖凝胶上的镍或钴金属离子结合的亲和力而被广泛使用，随后可用于纯化天然或变性状态的蛋白质。

Advanced Targeting Systems 抗-6-His-SAP是小鼠抗6His单克隆抗体和核糖体失活蛋白saporin的化学偶联物。它特别消除了细胞外表达6 His标记蛋白的细胞和识别YOUR 6 His标签重组蛋白的细胞。

Advanced Targeting Systems 抗-6-His-SAP特异性和制备：

这种标记靶向毒素识别细胞中过度表达的YOUR 6 His标记重组蛋白或6 His标签蛋白。抗-6-His-SAP是小鼠抗6His单克隆抗体的化学偶联物核糖体失活蛋白，saporin。

Advanced Targeting Systems 抗-6-His-SAP使用和储存：

抗6 His SAP特异性地消除具有6 His标记蛋白和细胞胞外表达的细胞识别YOUR 6 His标记的重组蛋白。材料可能有很多不同；工作稀释度必须由最终用户确定。如果这是一个新的批次，您必须评估在开始完整的实验方案之前进行工作稀释。使用前轻轻旋转材料；5-10秒的缩微胶片就足够了。将材料储存在未稀释的等分试样在-20°C下保存1-2个月。为了长期储存，将材料储存在–80°C。布料应等分至方便的体积和数量，以避免重复冷冻和解冻损害蛋白质含量。在这些条件下，该材料具有非常稳定的保质期。解冻应该是在室温或冰上进行。解冻的溶液在使用前应保持在冰上。

请勿将还原剂（如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇或抗坏血酸）用于此材料。它将使毒素失活。这种物质是一种极强的细胞毒素。应由经验丰富的人员进行搬运。手套和处理本产品时需要佩戴安全眼镜。处置时必须小心；高压灭菌或暴露至0.2M氢氧化钠将使材料失活。所有与此材料接触的实验室用品应同样处理。

注：当用于细胞毒性试验时，未结合的一级抗体将与一级抗体竞争与抗-6His-ZAP结合，并可通过竞争性抑制初级抗体-次级缀合物复合物来降低细胞毒性。

图：KNRK细胞以2500个细胞/90μl/孔接种在37°C下孵育过夜。第二天，Saporin和rIB4-在细胞培养基中进行SAP稀释，并加入10μl每个井。rIB4-6His在细胞培养基中稀释最终浓度为100 ng/10μl Anti-6 HisZAP，向每个孔中加入10μl。盘子在37°C下孵育72小时。为了发展，培养基是从平板上取下，用10%固定细胞TCA在4°C下持续1小时。用自来水并风干。50μl 0.4%向每个孔中加入磺胺若丹明B/1%乙酸并在室温下孵育板30分钟。这个用1%乙酸洗涤板3次以风干。用100μl 10mM溶解染料每孔无缓冲tris基底，轻轻摇动5分钟。在564nm下读取板，并进行数据分析使用Prism软件（GraphPad，圣地亚哥）

Advanced Targeting Systems ZAP试剂盒和二级标记方案：

ZAP抗体内化试剂盒文献

生物素-Z（链霉亲和素ZAP）文献

ZAP抗体内化试剂盒和生物素-Z（Streptavidin ZAP）视频教程

评估潜在靶向分子。（Kohls M，自然方法，2006）