基因的编辑调控技术—转染,您了解多少?
转染——是将外源基因如DNA、RNA导入真核细胞的技术。是真核细胞在一定条件下主动或被动导入外源基因而获得新的表型的过程。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、基因表达调控、突变分析和蛋白质生产等领域中,转染技术的应用越来越广泛。
图1 转染
转染的分类
根据外源性基因在真核细胞中表达时间的长短我们可将转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两种。在瞬时转染的细胞中,外源基因得以表达但它们并不会整合到细胞的基因组中,也就不会被复制,适用的核酸类型主要包括质粒DNA、siRNA、miRNA和mRNA。细胞瞬时转染的外源基因表达时间有限,通常仅持续几天,直到外源基因在细胞分裂过程中因各种因素丢失为止。稳定转染是建立在瞬时转染的基础上的,先对细胞进行转染,再对得到的细胞进行筛选,在少数转染细胞中,外源基因能够整合到细胞的基因组中。适用的核酸类型只有质粒DNA,且外源基因成为细胞基因组的一部分从而得以复制,这就是稳定转染细胞的标志。稳定转染细胞的子代细胞也同样表达外源基因,由此形成稳定转染的细胞系。
图2 瞬时转染和稳定转染的区别
常规细胞转染的途径
1.化学介导法
主要是使用载体分子去中和或者使带负电的核酸带正电荷,让核酸更容易进入细胞内。主要包括DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法、阳离子脂质体法、阳离子聚合物法等。
表3 化学介导法
化学介导法
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