试剂准备丨L-乳酸测定试剂盒相关制备

L-乳酸是乳酸的主要立体异构体，在缺氧或厌氧条件下，由乳酸脱氢酶（LDH）通过NADH作为辅因子，由丙酮酸形成。L-乳酸可以通过LDH转化回丙酮酸盐，以在更含氧的条件下进入糖异生。它在血液中循环，被各种细胞和组织吸收，但主要被骨骼肌和心肌用作替代能源。通过肝脏和肾脏清除。

当糖异生中的限速反应受损、丙酮酸利用被破坏，或在增加糖酵解的条件下（如剧烈运动、缺氧或败血症等疾病状态），L-乳酸会累积为乳酸酸中毒。乳酸酸中毒与危重症、败血症和肝衰竭等患者的预后不良和死亡率增加有关，并已被用作患者病情恶化的指标。

L-乳酸测定试剂盒试剂准备：

1.乳酸含量测定缓冲液（10X）-（编号700511）

该小瓶含有10ml 500mM磷酸钾溶液。将5ml含量测定缓冲液浓缩液与45ml纯水混合。该最终测定缓冲液（1X）（50mM磷酸钾，pH 7.5）用于测定。稀释缓冲液在4°C下稳定六个月。

2.乳酸辅因子混合物-（编号700512）

此小瓶含有LDH辅因子的冻干粉。用1.2 ml含量测定缓冲液（1X）重新配制小瓶内容物。这是足以测定60个孔的辅因子混合物。根据需要准备额外的小瓶。重组混合物在-20°C下稳定两周。

3.乳酸底物-（编号700513）

该小瓶含有乳酸基质冻干粉。用1.2 ml含量测定缓冲液（1X）重新配制小瓶内容物。这足以测定60个孔。根据需要准备额外的小瓶。重组基质在-20°C下稳定两周。

4.L-乳酸酶混合物-（编号700514）

这个小瓶含有一种酶的冻干粉。用2.5 ml含量测定缓冲液（1X）重新配制小瓶内容物，并将小瓶置于冰上。这是足以测定60孔的酶混合物。根据需要准备额外的小瓶。重组酶在4℃下稳定8小时或在-20℃下稳定两周。

5.L-乳酸标准品-（编号700515）

此小瓶含有L-乳酸冻干粉。用2ml稀释的测定缓冲液（1X）重新配制小瓶内容物，以制备5mM乳酸储备溶液。该储备溶液可用于制备标准曲线。重组标准品在室温下稳定8小时。

6.MPA分析试剂-（编号700518）

此小瓶含有2g偏磷酸（MPA）。将1.6g MPA溶解在40ml纯水中，制备0.5M MPA储备溶液，用于样品脱蛋白。在室温下储存稀释的酸溶液。稀释的酸在室温下稳定三个月。

7.碳酸钾含量测定试剂-（编号700517）

此小瓶含有5毫升5 M碳酸钾溶液。试剂已准备好使用。

L-乳酸测定试剂盒样品制备：

由于样品中存在LDH，在样品处理过程中必须小心防止乳酸转化为丙酮酸。样品在收集时必须脱蛋白，然后才能储存在-80°C.

通常，正常人血浆的L-乳酸浓度在750-2000µM。

1.使用抗凝剂如肝素或EDTA采集血液。

2.在25°C下以700-1000 x g离心血液10分钟。用移液管移走顶部黄色等离子层，而不干扰白色褐黄色层。

3.在1.5ml微量离心管中，加入500μl冷的0.5M MPA，使500μl血浆脱蛋白。旋转管子并放在冰上五分钟。

4.在4°C下以10000 x g离心5分钟以沉淀蛋白质。除去上清液，加入50μl碳酸钾以中和酸。

5.在4°C下以10000 x g离心5分钟，以除去任何沉淀的盐。取出上清液进行化验。

6.如果当天未进行分析，则在-80°C下冷冻。脱蛋白血浆样品在-80°C条件下保存一个月。

7.分析前，用含量测定缓冲液（1X）稀释样品1:2-1:4。