化学分析之中草药成分一般鉴别方法

中草药主要来自植物。植物的化学成分比较复杂，有些是植物所共有的，如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖、色素等。有些成分是某些植物所特有的，如生物碱、苷类、挥发油、有机酸、鞣质等。

各种化学成分都有一定的特征，一般可以将药材的外观、色、香、味作为初步检查和判断的手段之一。比如药材样品破碎后，横截面上没有油斑，挤压后也没有油渍，大多含有油脂或挥发油；淀粉和糖有很多层；闻出特殊气味者，多含挥发油、香豆素、内酯；口味偏甜的，含糖量较多；尝之者，多含生物碱、苷类及苦味物质；酸的含有有机酸；苦味含单宁等。

中药材中所含的化学成分都是各种混合物，分析时往往相互干扰，很难得到正确的结果。因此，根据溶解度、pH值、极性等理化性质。中药材中所含的各种化学成分，要通过各种成分的鉴别反应来鉴别。

(一)鉴定注意事项

1.根据灰分成分的不同性质，选择合适的溶剂进行提取，以保证其他成分能够被提取出来。

2.样品提取物的浓度应足以实现每个反应的灵敏度。

3.样品提取液的pH值不应影响鉴定反应所需的pH值。差异较大时，应提前调整。

4.提取液较深时，往往影响观察和鉴别反应的效果。此时可适当稀释或进一步提纯。

5.在鉴别反应过程中，应注意防止各种成分的相互干扰，以免出现假阳性或颜色不正确。在化学鉴定的同时，做空白色试验和对照试验(用已知含有某种成分的中药材或纯品作为阳性对照)。

6.在鉴别试验中，如果某一类成分的几种鉴别反应结果不一致(即有的是阳性，有的是阴性)，应进行综合分析。首先要注意阳性反应的试验是否属于该类成分的特定反应，否则要检查其他种类的成分是否能产生这种反应，从多方面进行判断。但也要注意，有些反应只能与某类成分中的某个化学基团发生反应。比如黄酮类化合物的盐酸-镁粉试验，只对黄酮类化合物中的羟基黄酮类化合物(黄酮醇)反应明显，其他种类的黄酮类化合物反应不明显。但是，不能轻易否认它们不是黄酮类化合物。为了避免孤立和片面的结论，必须综合分析考虑。

中药材的一般鉴别试验只是初步判断，最终确认还需要进一步提纯才能确认。

(2)识别方法

蛋白质、多肽、氨基酸

(1)加热或无机酸试验:取1ml试验溶液于试管中，加热至沸腾或加入5%盐酸。如果有浑浊或沉淀，说明含有水溶性蛋白质。

(2)缩二脲试验:取供试品水溶液1ml，加入10%氧化钠溶液2滴，摇匀，逐渐加入硫酸铜试液，随加量摇匀，并注意观察。如果是紫色或紫红色，可能含有蛋白质和氨基酸。

所有含有两个或两个以上肽键(- CONH -)的蛋白质结构都有此反应，在碱性溶液中能与Cu2+形成仙女络合物，表现出一系列显色反应。二肽为蓝色，三肽为紫色，添加的肽为红色。肽键越多，颜色越红。

(3)茚三酮检查:取试液1ml，加入2-3滴茚三酮试液，加热煮沸4-5分钟，冷却时呈红棕色或蓝紫色(蛋白质、蛋白胨、肽、氨基酸)。

α氨基酸与茚三酮反应，其酸被氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被还原成仲醇，仲醇与氨和另一分子茚三酮缩合生成蓝紫色化合物。

【注意】①茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂，反应在1小时内稳定。试剂溶液的pH值应在5-7，必要时可加入几滴吡啶或乙酸钠进行调节。

②这种反应非常敏感，但有些氨基酸是黄色而不是紫色，比如脯氨酸。

(4)氨基酸薄层色谱检测反应:

①吸附剂:硅胶g .

②展开剂:(1)正丁醇和水(1: 1) (2)正丁醇和乙酸和水(4: 1: 5)。

③显色剂:0.5%茚三酮丙酮溶液，喷洒后置于1100烘箱中5分钟，呈蓝紫色或紫色。

2.皂角苷

(1)泡沫试验:取2ml供试品水溶液于带塞试管中，用力摇动3min，会产生持续的蜂窝状泡沫(持续10min以上)，泡沫量不少于液体体积的1/3。

【注意】常用增溶剂吐温和司盘，摇匀后可产生持久泡沫，注意区别。

(2)溶血试验:取4支试管，分别加入0.25、0.5、0.75ml滤液，然后依次加入2.25、2.0、1.75、1.5ml生理盐水，使每支试管中的溶液变为2.5ml，再向每支试管中加入2.5ml的2%血细胞悬液，摇匀，置于370°水浴中或有溶血现象时，即表示阳性反应。

【注意】①鞣质能凝集红细胞，干扰溶血试验的观察，应提前除去(可用赢酰胺粉吸附或用明胶沉淀)。

②试液应为中性溶液。

(3)乙酸酐浓硫酸试验(LiebrmannBurchard反应):将供试品水溶液置于蒸发皿中，水浴蒸发，残渣加入少量冰醋酸使其溶解，再加入乙酸酐浓硫酸(19: 1)试液，试液呈红紫色和污绿色(甾体、三萜或皂苷)。

(4)区分甾体皂苷和三萜皂苷:取两个带塞试管，每个供试品溶1ml水，一个试管中加入2ml 0.1N盐酸溶液，另一个试管中加入2ml 0.1N氢氧化钠溶液，用力摇动1min(需左右手交替摇动半分钟)，观察两个试管中的泡沫量。如果两管泡沫体积相同或酸管较多，说明含有三萜皂苷；如果加碱管中的泡沫多于加酸管中的泡沫，则甾体含量表示甾体皂苷含量。

三萜皂苷是酸性皂苷，在酸性水溶液中形成稳定的泡沫。甾体皂甙是中性皂甙，在碱性稗草溶液中能形成稳定的泡沫。