口腔大黄滴剂的实验研究

摘要:目的:开发一种新型、有效的牙周抗菌剂以替代传统药物。方法:采用琼脂稀释法检测几种常见口腔细菌对总蒽醌和大黄酸标准品的敏感性。壳聚糖对常见口腔细菌的凝集试验。采用龋齿活性试验进行壳聚糖对变形链球菌的解吸试验。用钢管法进行了大黄滴剂对常见口腔细菌的抑菌试验。结果:大黄总蒽醌和大黄酸标准品对常见口腔细菌有不同程度的抑菌作用。壳聚糖能凝集除双歧牙以外的其他常见口腔细菌。壳聚糖可以解吸附变形链球菌。成品大黄滴剂对口腔常见细菌有抗菌作用。结论:大黄滴剂具有明显的抑菌作用。

牙周病是由牙菌斑引起的牙齿周围组织的慢性破坏性疾病。选择有效的抗菌药物控制引起牙周病的菌斑，取得了明显的疗效。但目前牙周病的抗菌药物多局限于抗生素类化学药物，而对中药的研究很少。我们利用大黄和壳聚糖明显的抗厌氧菌作用制成大黄滴剂，旨在提出一种新的试验，在一个大网站上收集牙周抗菌制剂。主要实验室研究报告如下。

1.材料和方法

1.1标准菌株和培养条件

1.1.1标准菌株选自北京口腔医学研究所微生物室保存的国际标准菌株。牙龈卟啉单胞菌P381和ATCC33277、粘性放线菌ATCC19246、中间侧柏ATCC25261、具核梭杆菌ATCC10953、放线杆菌Y4、变形链球菌C和D、中间链球菌ATCC27335、齿双歧杆菌ATCC27534。

1.1.2培养条件变形链球菌和中间链球菌在MSA培养基中培养2天，其余菌株在CDC培养基中培养5天。

1.2主要试剂

1.2.1大黄总蒽醌由北京药物研究所提供。

1.2.2大黄酸标准物质中国药品生物制品检定所，0757-9703。

1.2.3壳聚糖比度0.78，粘度45厘泊，灰分0.8%。

1.2.4北京口腔医院药房制备大黄滴剂。

1.3实验方法

1.3.1大黄对牙周致病菌的抗菌试验。取大黄总蒽醌和大黄酸标准品，用琼脂稀释法做细菌敏感性试验[1]。

1.3.2壳聚糖凝集试验将各细菌接种于相应的液体培养基中，培养基中含有一定浓度的壳聚糖，培养后观察各细菌的生长情况。

1.3.3壳聚糖对变形链球菌的解吸试验采用龋活性试验方法。培养48小时后，将标准平板浸入含有变形链球菌的液体培养基中，然后将附着有变形链球菌的平板浸入含有壳聚糖的溶液中，连续观察附着的变形链球菌从平板上脱落。

1.3.4大黄滴剂的体外抗菌实验。将成品大黄滴剂按倍数稀释原理稀释至原液的100%、50%、25%、12.5%、6.25%，然后用钢管法加入各菌的菌板中，培养后观察抗菌结果。

结出果实

2.1大黄抑菌试验结果表明，大黄总蒽醌和大黄酸标准品的抑菌效果几乎相同，除了对变形链球菌、中间链球菌和伴放线放线杆菌有影响外，对其他常见口腔细菌均有影响。对牙龈卟啉单胞菌ATCC33277和侧柏ATCC25261，大黄总蒽醌浓度为1.4μg/ml，大黄酸标准品浓度为4.17μg/ml，具有抗菌作用。

2.2壳聚糖的凝集结果除齿双歧杆菌ATCC27534外，壳聚糖对口腔其他常见细菌均有凝集作用。

2.3壳聚糖解吸试验结果表明，壳聚糖对附着变形锤有一定的解吸作用，这种作用的最有效浓度为5mg/ml。涂抹壳聚糖后，10min分钟后开始起效，60min分钟后，附着的变形链球菌被完全清除。

2.4大黄滴剂体外抑菌试验结果对常见口腔细菌有明显抑菌作用，即使稀释至原液的1/16，仍有效果。

3.讨论

在中国，用大黄治疗疾病有着悠久的历史。大黄具有广谱抗菌作用，大黄中的有效成分为蒽醌衍生物，蒽醌衍生物中的抗菌成分为大黄酸、大黄素和芦荟大黄素。王文峰等[2]报道大黄蒽醌衍生物对100种临床厌氧菌有较强的抑制作用。我们利用大黄明显的抗厌氧菌作用，特别是对脆弱类杆菌和黑素生成菌的敏感性，制备治疗牙周病的中药抗菌药物。

采用琼脂稀释法检测几种常见口腔细菌对总蒽醌和大黄酸标准品的敏感性。发现两种细菌的抗菌效果基本相同，对牙周致病菌都有不同程度的抑制作用，尤其是牙龈卟啉单胞菌ATCC33277和中间侧柏ATCC25261，即使浓度为1.4μg/ml。而大黄对变形链球菌、中间链球菌、放线杆菌无抑菌作用，说明对放线杆菌引起的青少年牙周炎可能无作用，但对厌氧菌引起的牙周炎有较好的作用。

壳聚糖作为一种生物多糖聚合物，作为填充剂、粘合剂、薄膜包衣材料、缓控释材料等在医学上得到广泛研究。因为其溶解性、成膜性、可吸收性和生物相容性[3]。近年来，在口腔中的应用越来越受到重视。壳聚糖能凝集除双歧杆菌以外的其他常见口腔细菌。这样壳聚糖可以在局部凝集沉淀牙周袋内的细菌，然后局部用药，不会在整个牙周袋内达到很高的浓度。这就是壳聚糖作为缓控释制剂的特点。

壳聚糖可以解吸变形链球菌，弥补了大黄对变形链球菌抑菌效果不理想的缺点，使变形链球菌从牙面脱落，抑制牙菌斑在牙面的附着。变形链球菌是牙颈部龈上菌斑的重要成分，龈上菌斑的存在为龈下菌斑的形成创造了条件。因此，消除龈上菌斑是防止龈下菌斑形成的前提，而壳聚糖对变形链球菌的吸附恰恰抑制了龈上菌斑的形成，不利于牙周病的发生。实际上，壳聚糖对变形链球菌的解吸和凝集是相辅相成的。

大黄酸标准品和大黄酸总蒽醌的抑菌效果大致相同，但大黄酸标准品的提取困难且价格昂贵。考虑到大黄酸提取工艺的复杂性和患者对药品价格的接受能力，我们采用大黄酸总蒽醌代替标准大黄酸作为抑菌剂，壳聚糖作为辅料制备大黄酸滴剂。体外抑菌实验证明大黄酸滴剂对常见口腔细菌有抑制作用。

综上所述，大黄滴剂经实验室研究证明具有明显的抑菌作用，其临床疗效有待进一步观察。

参考

[1]肖小荣著。口腔医学与实用技术。北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993，163。

[2]王文峰等。大黄生卒年研究。蒽醌衍生物抗厌氧菌的实验研究。中国药科大学学报，1990，21 (6): 354 ~ 357。

[3]罗，高天辉主编。药用辅料全集。成都:四川科学技术出版社，1993，319。