仪器分析——紫外

1.仪器的校准和验证。由于温度变化对机械零件的影响，仪器的波长往往会有微小的变化。因此，除了对所用仪器进行定期的全面校准和检定外，测量波长也应在测量前进行校准。常用汞灯中的强谱线是237.83纳米、253.65纳米、275.28纳米、296.73纳米、313.16纳米、334.15纳米、365.02纳米、404.66纳米、435.83纳米、546.07纳米和576.96纳米，或者仪器中的氘灯是486.02纳米。钬玻璃在波长279.4纳米、287.5纳米、333.7纳米、360.9纳米、418.5纳米、460.0纳米、484.5纳米、536.2纳米和637.5纳米处具有尖锐的吸收峰，也可用于波长校正。但由于来源不同或随时间略有变化，使用时要注意。

吸光度的准确性可以通过重铬酸钾的硫酸溶液来验证。取约60mg经120℃烘干的基准重铬酸钾至恒重，准确称取，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定波长下测量并计算其吸收系数，与规定的吸收系数比较，符合下表。

波长/nm 235(最小)257() 313(最小)350()
吸收系数(E1 % 1cm)124.5 144.0 48.62 106.6
标准值及其允许范围123.0 ~ 126.0 142.8 ~ 146

杂散光的检查可按下表所列试剂和浓度制成水溶液，置于1cm应时吸收池中，测量规定波长下的透光率，应符合表中规定。

试剂浓度/%(g/ml)由波长/nm透过率/%
碘化钠1.00 220 < 0.8
亚硝酸钠5.00 340 < 0.8。

2.对溶剂的要求含有杂原子的有机溶剂通常具有很强的末端吸收。因此，当它们用作溶剂时，它们的应用范围不能小于截止波长。例如，甲醇和乙醇的截止波长是205纳米。此外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定样品前，首先应检查所用溶剂在样品波长附近是否符合要求，即使用1cm应时吸收溶剂，用空气体测其吸光度为空白色(即空白光路无物质)。溶剂吸收池的吸光度在220-240纳米范围内不得超过0.40，在241-250纳米范围内不得超过0.20，在251-300纳米范围内不得超过0.10，在300纳米以上不得超过0.05。

3.除另有规定外，应使用与制备供试品溶液相同批次的溶剂作为空白色对照，用1cm的应时吸收池在规定的吸收峰波长2nm范围内测定几个点的吸光度，或仪器在规定波长附近自动扫描，检查供试品吸收峰波长的位置是否正确。除非另有规定，吸收峰波长应在该品种的规定波长内。一般来说，测试溶液的吸光度读数在0.3和0.7之间有很小的误差。仪器的狭缝带宽应小于样品吸收带半宽的十分之一，否则测得的吸光度会低；狭缝宽度的选择应该基于这样的事实，即当狭缝宽度减小时，样品的吸光度不会增加。由于吸收池和溶剂本身可能存在空白色吸收，因此在测定样品的吸光度后应减去空的白色读数，或者在计算含量前由仪器自动扣除空的白色读数。

当溶液的pH值影响测定结果时，应调整供试品溶液和参比溶液的pH值使之一致。

用于鉴别和检查项目的方法应按照每个品种下的方法进行。

含量测定一般有以下几种方法。

(1)按各品种项下的方法，分别制备供试品溶液和对照品溶液。供试品溶液中供试品成分的量应为供试品溶液中供试品成分规定量的100%±10%，所用溶剂应完全一致。在规定波长下测量供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，根据下列公式计算供试品溶液中供试品溶液的浓度:

CX=(AX/AR)CR

式中，CX为试验溶液的浓度；

AX是测试溶液的吸光度；来源:考试大学

CR是参考溶液的浓度；

AR是参考溶液的吸光度。

(2)吸收系数法按每个品种下的方法配制供试品溶液，在规定的波长下测定其吸光度，再用该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用这种方法测量时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校准和检定。

(3)计算分光光度法计算分光光度法有很多种，都应按照每个品种下规定的方法进行。在吸收曲线突然上升或下降的位置测量吸光度时，波长的微小变化可能对测量结果产生显著影响，因此对照品和供试品的测试条件应尽可能一致。计算分光光度法一般不适合含量测定。

(4)比色法:样品本身在紫外-可见区无强吸收，但加入适当的显色剂可测定。

用比色法测定时，由于影响显色深度的因素很多，应选择对照品或标准品同时操作。除非另有规定，比色法所用的空白是指用等体积的溶剂替换对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，用同样的方法处理。在规定波长下测量对照品和供试品溶液的吸光度后，根据上述方法(1)计算供试品溶液的浓度。

当吸光度与浓度的关系不是线性时，取若干梯度参比溶液，用溶剂加至同体积，显色后测定每种溶液的吸光度，然后用该吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度计算其在标准曲线上的含量。