生物实验——降钙素生物检定法

该法定体系是通过比较大鼠血钙的降低程度来确定降钙素标准物质(S)和受试物质(T)的效价的方法。

称取0.2g牛血清白蛋白，加入20ml水，混匀，置于56℃水浴中1小时，取出后置于室温，冷冻于-10 ~-20℃即得。实验前取出，在36℃±0.5℃水浴中融化。加入到含2g乙酸钠的水溶液中，加入约3.5ml浓盐酸，加水至总量为200ml，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至3.5 ~ 4.5，最后加水至200ml。

在标准溶液制备实验当天，根据降钙素标准的标示效价，用上述溶剂制备了高、低剂量组(ds2、ds1)两种标准溶液。一般高浓度标准溶液的浓度应控制在60 ~ 100 miu/ml。高、低浓度之比(r)不应大于3∶1。

根据待测样品中降钙素的标示量或估计效价(AT)，按照标准溶液的制备方法制备高、低浓度(dT2、DT1)的待测样品溶液。浓度的比值(R)应与标准样品的比值相同，各剂量组中供试品与标准样品反应的平均值应相近。

检查来源:考试大学

选择健康大鼠，体重40-250克，性别相同，来源相同。实验中使用的大鼠体重差异不超过20g。实验前，他们禁食16小时，自由饮用蒸馏水。根据体重随机分为四组:标准品高、低剂量组和供试品高、低剂量组，每组不少于5只。将每组动物称重并编号，根据其体重将相应浓度的标准溶液或供试品溶液皮下注射到每组动物的腹部，剂量为0.4ml/100g体重。注射后，每只动物精确计时1小时，然后按给药前和给药后的顺序从眼静脉丛取血。使用合适的方法，如邻甲酚酞络合剂，来测定血钙值。根据生物测定统计法(附录ⅴ)中的数量反应平行测定法计算效价和实验误差。

本法置信限率FL(%)不得超过45%。